※ 在離體狀態下組織及細胞中的RNA很不穩定,極易降解。從新鮮組織或細胞中提取RNA時,樣品若不能馬上處理,則通常需要置于液氮保存,極不方便。RNAlate是一種無毒的可直接使用的樣品儲存液,可使RNase失活,從而保持新鮮組織樣品里的RNA免受降解。置于該溶液中的新鮮組織或細胞可在沒有液氮或超低溫冰箱的條件下保存較長時間而不影響RNA的完整性,從而有效地解決了樣品保存及運輸的問題。
※ 產品描述 RNAlater是一種液態的,無毒的組織保存試劑。它能迅速穩定組織,保護非冷凍細胞RNA于原位。獲得組織塊后,迅速浸泡在 RNAlater中保存,而不會引起RNA的降解,這樣可以不必馬上處理樣本或將樣本冷凍在液氮之中以備以后處理。
※ RNAlater應保存在室溫下,保質期6個月。如放置在4℃條件下則會引起沉淀,此時需加熱到37℃才可澄清。 RNAlater可廣泛應用于多種脊椎動物樣本。包括腦、心、腎、脾、肝、睪丸、骨骼肌、脂肪、肺和胸腺。RNAlater對大腸桿菌、果蠅、組織培養細胞、全血細胞和一些植物也有效。
※ RNAlater不影響樣品的后續處理,可以配合各種常見的 RNA抽提試劑盒使用,例如TRIzol、RNAzol、各種RNA提取試劑盒、酚抽法以及利用Oligo(dT)原理的mRNA抽提試劑
RNAlater的使用方法
1. RNAlater 只能用于新鮮組織,在浸入RNAlater之前不能冷凍組織。簡單切碎組織樣本,任何一邊的最大厚度不能大于0.5cm, 然后將組織碎塊放入到5倍體積的RNAlater中保存。
動物組織 RNAlater不會溶解或破壞組織樣本的結構。如果需要的話,仍可將已經平衡在RNAlater溶液中的組織取出并分割成更小的塊再重新放入到
RNAlater中。小器官如鼠肝、腎和脾可以完整地保存在RNAlater中。
植物組織許多植物組織可以簡單浸泡在5倍體積的RNAlater中保存。具有自然屏障防止擴散的植物如蠟表皮的葉組織可能需要先破壞其屏障,以允許RNAlater進入組織
組織培養細胞沉淀細胞,用PBS洗一次,再用少量的PBS懸浮細胞,然后加5~10倍體積的RNAlater保存。
白細胞如果將白細胞從紅細胞和血清中分離出來,并按組織培養細胞一樣處理后,白細胞便能有效地保存在RNAlater中。不要將全血、血漿或血清中的RNA保存在RNAlater中,因為它們蛋白含量過高,與RNAlater混合后易形成不溶的沉淀。
細菌( 以下內容是根據Ambion公司的產品說明書編譯的,僅供參考)
RNAlater是抑菌的,雖然細菌在RNAlater中不能生長,但細胞仍保持其完整性。大腸桿菌保存在RNAlater中4℃條件下1個月仍很完整,產生不降解的RNA。
2. RNAlater中樣品的保存
保存于-80℃ 建議用于批量保存。將樣本在4℃條件下孵育過夜,然后從RNAlater溶液中取出樣本保存于-80℃。對于組織培養細胞,不必移去RNAlater,只需簡單凍存整個溶液。實驗證明,細胞在-80℃條件下凍存于RNAlater溶液中并未出現溶解。樣本可隨后在室溫下解凍及再凍存,其RNA的質和量都不會受到影響。
保存于-20℃ 建議用于批量保存。將樣本在4℃條件下孵育過夜,然后轉移到-20℃。樣本在-20℃條件下不會凍結,但在存貯緩沖液中會有結晶形成,這并不影響隨后的RNA提取。樣本可隨后在室溫下解凍及再凍存,其RNA的質和量都不會受到影響。
保存于4℃ 目前尚無證據證明樣本存于4℃ 1個月內會出現RNA降解。
如果沒有冰箱 將樣本放在盡可能冷的環境中。如果周圍溫度超過25℃,應盡可能使RNAlater中的樣本冰浴數小時。
3. RNAlater 中樣本的RNA提取
組織 用消毒鑷子將組織從存貯溶液RNAlater中取出,浸泡在RNA提取溶液中。一旦將組織放入RNA提取溶液中,勻漿一定要迅速進行。
細胞 從存貯在RNAlater中的細胞中提取RNA有兩種操作方法可供選擇:去除RNAlater或者從細胞與RNAlater的混合物中直接提取RNA。
4. 從RNAlater 中取出樣品
去除RNAlater 因為RNAlater的濃度比典型的細胞培養介質的濃度高,因此用通常沉淀活細胞的離心力無法沉淀RNAlater中的細胞。離心沉淀細胞,去除RNAlater。(HeLa細胞大約需要3000×g,但其他細胞可能不能容忍這個速度,或者他們需要更大的離心力。)
從RNAlater中的細胞直接提取RNA 作為選擇,我們可以用一步法破碎/提取溶液(如TRI Reagent和 RNAwiz。⿵臎]有去除RNAlater的細胞中純化RNA。這可通過向細胞混合物中加入10倍體積的一步提取溶液完成,其他照常。