濟南星寶生物技術有限公司

產品簡介

R-RVC

病毒總RNA快提試劑盒

試劑盒內容	50次 Cat：RN150	250次 Cat: RN160
Miniprep column	50	50×5
2 ml microfuge tube	50	50×5
溶液RN1 Buffer RN1	25 ml	25 ml×5
溶液RN2 Buffer RN2	15 ml	15 ml×5
RNA Carrier	350ul ml	350ul×5
溶液RW1 Buffer RW1	15 ml	15 ml×5
溶液RW2 Buffer RW2	15 ml	15 ml×5
溶液TE Buffer TE	10 ml	10 ml×3
說明書 Protocol	1	1

貯存條件：

RNA Carrier -20℃保存，其他室溫或4℃，有效期2年。

產品簡介：

※ GalaxyBio 公司與美國公司通力合作，由美方提供全方面技術、關鍵純化材料，將核酸純化等系列產品，在國內推廣，實現了進口產品本土化生產。每種產品通過嚴格的技術把關，已達到進口產品的品質，而價格上卻是國產試劑盒的價位

※ 采用獨特的組織細胞裂解沉淀技術，快速、方便，高得率、高純度。

※ 提取的RNA分子完整、純度高，適用于Northern Blot 、RT-PCR、體外翻譯、Primer Extension、RNase保護測定、構建cDNA文庫等各種分子生物學實驗。

注意事項:

1. 所有試劑用DEPC處理過的溶劑配制。請選用RNase-free槍頭和離心管，以避免提取過程中RNA被RNase降解。

2. 試劑含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水和生理鹽水沖洗，必要時尋求醫療咨詢。

3.試驗中需要異丙醇和乙醇，請提前準備RNase-free的異丙醇和乙醇。

操作步驟：

1.試驗前準備及注意事項

試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標簽說明在溶液RW1 和溶液RW2中加入無水乙醇，并做好標記；溶液使用后，避免長期暴露于空氣中，用后請及時蓋緊蓋子,密閉保存。

2.樣品處理

1）液體標本：血清、血漿、腦脊髓液、分泌液、唾液、腹水、液體糞便、其他分泌物等，12,000×g離心5min，取上清約300ul體積的樣品，加入400 μl Buffer RN1，再加入300 μl Buffer RN2用吸頭抽吸，混合均勻，

冰浴5 min。（樣品較少時，Buffer RN1和RN2按比例同時縮��；也可同時增大) 。

2）液體標本濃縮處理：適合病毒拷貝少的標本

取適當體積的液體標本，加入同體積的異丙醇，12,000×g離心10 min，盡量棄去上清。加入400μl Buffer RN1，用吸頭抽吸，混合均勻，冰浴5 min。

3）眼、鼻、喉等拭樣：

a.將拭樣轉移到離心管中，加入2 ml PBS (或生理鹽水，用戶自備)，4℃浸泡2～5h；

b.入同體積的異丙醇，12,000×g離心10 min，盡量棄去上清

c.入400μl Buffer RN1，用吸頭抽吸，混合均勻, 冰浴5 min.

4）從培養貼壁細胞中提取病毒RNA：盡量倒掉培養上清后，不須消化，直接加入Buffer RN1體積按10cm²/ml比例加入。

5）從懸浮細胞中提取病毒RNA：可直接離心收集細胞，每400ul Buffer RN1可裂解5×10⁶動物、植物或酵母細胞，或10⁷細菌細胞

3. 12,000×g 離心10 min。

* 4℃條件下離心。

4. 取上清至1.5 ml離心管中，每140ul加入1ul RNA Carrier 。加入0.6體積的異丙醇（或加入1體積無水乙醇），混合均勻。

步驟5-9可選擇硅膠膜吸附法或離心沉淀法：

* 硅膠膜吸附法與離心沉淀法相比，前者更純凈，而后者提取量大，如病毒拷貝較少時，可采用后者。

A. 硅膠膜吸附法

5A. 將制備管置于2 ml (試劑盒內提供) 離心管中，轉移步驟4中的混合液到制備管中，6,000×g離心1min。

* 4℃條件下離心。

6A. 棄濾液，將制備管棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，制備管中加入700 μl Buffer RW1，12,000×g離心1 min。

* 確認在Buffer中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

7A. 棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，在制備管中加入700 μl Buffer RW2，12,000×g離心1 min；以同樣的方法再用700 μl Buffer RW2洗滌一次。

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

8A. 棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，12,000×g離心1 min。

9A. 將制備管放入干凈RNase-free的1.5 ml離心管中，在制備管膜中央加60-100 μl Buffer RTE (DNase﹠RNase-free) 。室溫靜置1 min，12,000×g離心1 min，洗脫得RNA

B. 離心沉淀法

5B. 12,000×g離心10 min，盡量棄去上清。

6B. 加入700 μl Buffer RW1，2,000×g離心5 min。

* 確認在Buffer Buffer RW1中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

7B. 棄去管中溶液，加入700 μl Buffer RW2；2,000×g離心5 min。

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

8B. 棄去管中溶液，自然干燥。

9B. 加入10-50 μlBuffer TE (DNase﹠RNase-free) ，溶解RNA。

RNA定量及純度檢測

總RNA 的定量和定性分析: 所有標本均經紫外分光光度儀檢測所提取總RNA 的濃度及純度,OD260/OD280 的值為1.7～ 2.0。



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