操作步驟：

1.試驗前準備及注意事項

試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標簽說明在溶液RW1 和溶液RPE中加入無水乙醇，并做好標記；溶液使用后，避免長期暴露于空氣中，用后請及時蓋緊蓋子,密閉保存。

2. 200-400 μl 全血加入3-4倍  Solution EL在離心管中混勻。

* 如果血樣的體積在200-400 μl之間，適當調整加入Solution EL的體積。

3. 冰浴10-15 min。冰浴期間，溫和混勻2次。3,000×g 離心5 min。用吸頭盡可能丟棄上相。

* 4℃條件下離心。

4. 再加入0.5 ml-1ml Solution EL，溫和混勻，冰浴5 min。

* 如果血樣的體積在200-400 μl之間，適當調整加入Solution ELL的體積。

* 此步驟可重復，盡量裂解除去紅細胞。

5. 3,000×g 離心5 min，盡量棄去上清，。

* 4℃條件下離心。

6. 加入250 μl Buffer RLT，用吸頭抽吸，混合均勻。

7. 加入80μl Buffer RN2，振蕩混勻10S, 12,000×g 離心10 min。

* 4℃條件下離心。

8. 取上清至1.5 ml離心管中。加入等體積無水乙醇，混合均勻。

步驟9-13可選擇離心法或負壓法

A. 離心法

9A. 將制備管置于2 ml (試劑盒內提供) 離心管中，轉移步驟8中的混合液到制備管中，6,000×g離心1min。

* 4℃條件下離心。

10A. 棄濾液，將制備管棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，制備管中加入700 μl Buffer RW1，12,000×g離心1 min。

* 確認在Buffer中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

11A. 棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，在制備管中加入700 μl Buffer RPE，12,000×g離心1 min；以同樣的方法再用700 μl Buffer RPE洗滌一次。

* 確認在Buffer W2 concentrate中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

12A. 棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，12,000×g離心1 min。

13A. 將制備管放入干凈RNase-free的1.5 ml離心管中，在制備管膜中央加60-100 μl Buffer RTE (DNase﹠RNase-free) 。室溫靜置1 min，12,000×g離心1 min，洗脫得RNA

B. 負壓法

9B. 將制備管插到負壓裝置的插口上，將步驟8中的混合液移入制備管中，開啟并調節負壓至-20-30英寸汞柱，吸盡管中溶液。

10B. 保持負壓，加入700 μl Buffer RW1，吸盡管中溶液。

* 確認在Buffer Buffer RW1中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

11B. 保持負壓，沿管壁四周加入700 μl Buffer RPE，吸盡管中溶液；以同樣方法再用700 μl Buffer RPE洗滌一次。

* 確認在Buffer Buffer RPE中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。

12B. 將制備管置于一個2 ml離心管（試劑盒內提供）中，12,000×g離心1 min。

13B. 將制備管放入干凈RNase-free的1.5 ml離心管中，在制備管膜中央加60-100 μl Buffer TE (DNase﹠RNase-free) 。室溫靜置1 min，12,000×g離心1 min，洗脫得RNA。

RNA定量及純度檢測