2. 試劑含刺激性化合物，操作時要戴乳膠手套和眼鏡，避免沾染皮膚、眼睛和衣服，謹防吸入口鼻。若沾染皮膚、眼睛時，要立即用大量清水和生理鹽水沖洗，必要時尋求醫療咨詢。
3.試驗中需要異丙醇和乙醇，請提前準備RNase-free的異丙醇和乙醇。
操作步驟：
1.試驗前準備及注意事項
試劑盒在第一次使用前請按試劑瓶標簽說明在溶液RW1 和溶液RPE中加入無水乙醇，并做好標記；溶液使用后，避免長期暴露于空氣中，用后請及時蓋緊蓋子,密閉保存。
2.約200μl 骨髓細胞加入400μl Buffer RS 在離心管中混勻。溫和充分震蕩幾次。
*Buffer RS 占的比例越大，RNA穩定。大于4倍時，可以4℃保存12個
月.一般情況可以-20—-80℃長期保存。
3.加入400ul溶液RR,顛倒混勻。
* 禁止使用蝸旋器，防止基因組斷裂混入。4℃條件下離心。
4. 大于12000×g 離心10 min。
* 4℃條件下離心
5. 取上清至1.5 ml離心管中，加入0.6體積的異丙醇（或加入1體積無水乙醇），混合均勻。此步提取幾百個堿基的小片段RNA是必須的。
步驟6-10可選擇硅膠膜離心柱吸附法（較為純凈）或直接離心沉淀法（相對前者提取量較多）
A. 硅膠膜離心柱吸附法（較為純凈）
6A. 將制備管置于2 ml (試劑盒內提供) 離心管中，轉移步驟5中的混合液到制備管中，6,000×g離心1min（如果液體較多可以分兩次轉移和離心）。
* 4℃條件下離心。
7A. 棄濾液，將制備管棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，制備管中加入700 μl Buffer RW1，12,000×g離心1 min。
* 確認在BufferRW1 中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
8A. 棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，在制備管中加入700 μl Buffer RPE，12,000×g離心1 min；以同樣的方法再用700 μl Buffer RPE洗滌一次。
* 確認在BufferRPE中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
9A. 棄濾液，將制備管置回到2 ml離心管中，12,000×g離心1 min。
10A. 將制備管放入干凈RNase-free的1.5 ml離心管中，在制備管膜中央加30-100 μl RNase-free Water（加入液體越少，濃度越大） 。室溫靜置1 min，12,000×g離心1 min，洗脫得RNA
B. 直接離心沉淀法（相對前者提取量較多）
6B. 大于12000×g 離心10 min。
* 4℃條件下離心
7A. 棄濾液，離心管中加入700 μl Buffer RW1，懸浮沉淀，12,000×g離心5 min。
* 確認在Buffer RW1中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
8A. 棄濾液，離心管中加入700 μl Buffer RPE，懸浮沉淀12,000×g離心5 min。
* 確認在Buffer RPE中已按試劑瓶上指定的體積加入無水乙醇。
9A. 盡棄濾液，室溫干燥去除乙醇。
10A.加入10-100 μl RNase-free Water，溶解沉淀，即得RNA
RNA定量及純度檢測
總RNA 的定量和定性分析: 所有標本均經紫外分光光度儀檢測所提取總RNA 的濃度及純度,ODA260/ODA280 的值為1.7～ 2.0。
EZ-RNA-B3
骨髓細胞總RNA小量快提試劑盒
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試劑盒內容 |
50次
Cat：RN325 |
250次
Cat: RN326 |
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Miniprep column |
50 |
50×5 |
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2 ml microfuge tube |
50 |
50×5 |
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溶液RS Solution RS |
25 ml |
25ml×5 |
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溶液RR Buffer RR |
25 ml |
25 ml×5 |
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溶液RW1 Buffer RW1 |
15 ml |
15 ml×5 |
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溶液RPE Buffer RPE |
15 ml |
15 ml×5 |
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RNase-free Water |
10 ml |
10 ml×3 |
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說明書 Protocol |
1 |
1 |
貯存條件：
室溫，有效期2年。
