* 加Buffer S3 后藍色會消失，充分混勻以保證懸浮物中藍色均消失。
6. 過濾 將上清全部轉入過濾柱，一般可以靠重力過濾，也可適當3000×g 離心min，。
7. 去內毒素
a..將上述操作的上清液體轉移另一離心管中(忌取到沉淀)，加10ml 去內毒素S4,振蕩混勻，
b.不時振蕩數次每次30秒。
c. 10,000 rpm,30℃離心5 min。
d. 溶液分為兩相。上層水相含DNA，下層油狀相含內毒素。
8. 柱結合.將含DNA的上層水相轉移到吸附柱Spin Column中，棄層油狀相。寧肯少提上層水相，也不要不要吸到中間層。一般一次抽提就可以符合標準；也可以根據需要重復抽提2次，即重復步驟a-d兩次
10,000×g 離心2 min，棄濾液。如過濾不完全，可以適當延長離心時間。
9. 漂洗 將13ml的漂洗緩沖液 加入吸附柱中，10,000×g 離心（4°C）2 min,棄濾液。
10. 再漂洗 將13ml的漂洗緩沖液 加入吸附柱中，10,000×g 離心（4°C）2 min,棄濾液。 空柱10,000×g 離心（4°C）2 min，除去殘留乙醇。
11.
洗脫 將吸附柱置于潔凈的50 ml 離心管中，在吸附柱的膜中央上加1.5 ～3.5ml Elution Buffer，室溫 靜置5 min�！�10,000×g 離心5 min 收集質粒DNA。
注意：Elution Buffer 組成為2.5mM Tris-HCI (pH8.5),不影響測序和酶切反應，把水或洗脫液加熱于65℃使用時有利于提高洗脫液效率，如果提取的質粒>10kb，請將洗脫液預熱至65℃，并適當延長洗脫時間。
質粒DNA濃度和純度檢測
OD260值為1，相當于50ug/ml的雙鏈DNA。也可以通過DNA Marker通過瓊脂糖凝膠電泳半定量。
OD260/ OD280比值一般為1.7-1.8，如果洗脫時不使用緩沖液，而使用去離子水，由于受PH值和離子濃度的影響，比值會偏低。
超純質粒DNA大量提取試劑盒
（去內毒素、去蛋白）
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試劑盒內容 |
10 TESTS
Cat:FP093 |
50 TESTS
Cat:FP094 |
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RNaseA (10mg/ml) |
300ul×5 |
300ul×25 |
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溶液S1 Resuspension Buffer |
125ml |
125 ml×5 |
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溶液S2 Lysis Buffer |
125ml |
125 ml×5 |
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溶液S3 Neutralization Buffer |
145ml |
145 ml×5 |
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去內毒素溶液S4 Solution S4 |
105ml |
105 ml×5 |
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漂洗緩沖液Wash Buffer |
30 ml×2 |
30 ml×10 |
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洗脫緩沖液 Elution Buffer |
15 ml×2 |
15ml×10 |
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過濾柱 Filter Column |
10 |
50 |
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吸附柱 Spin Column |
10 |
50 |
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收集管 Collection Tube(50ml) |
20 |
100 |
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說明書 Specification |
1 |
1 |
貯存條件：
室溫，有效期一年。溶液S1加入RNase后2-8℃保存
