使用方法:
加液1、8ml滴瓶包裝(少量試驗首選)
滴瓶垂直滴加每滴50ul,每孔各一滴。
2、 100ml、500ml或更大包裝。
根據需要等量混合,每孔100ul。注意混合馬上使用
溫育:上述加液后,根據個人試驗需要,可溫育5-30分鐘
終止:加等體積的1N的HCl或者2N的H2SO4來終止反應。酶標孔中反應液從藍色變為黃色。
讀數:終止反應后,30分鐘內在450nm處讀數
不加終止液可以在620-650nm處讀數 |
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注意:
降低底物強度:如果出現高的反應背景和/或沉淀,表明TMB底物反應過于強烈。為了避免產生沉淀,可以在加入終止液后馬上讀數;另外,可以進一步稀釋一抗和/或HRP結合物。為了降低非特異性背景顏色,推薦進一步降低一抗和/或HRP結合物的濃度,盡量避免降低底物濃度。動力學檢測:TMB單組分底物在與過氧化物酶反應時產生一種藍色,可以在加底物后620-650nm處讀數,不需終止反應 |