長臂生物素標記試劑盒
Long-armed Biotin Label Kit
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Cat |
試劑盒組分 |
規格 |
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SA821 |
REAGENTⅠ長臂生物素 |
1mg×10 |
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SA822 |
REAGENTⅠ長臂生物素 |
1mg×20 |
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SA823 |
REAGENT Ⅱ 溶媒 |
1.5ml |
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SA814 |
REAGENT Ⅳ 2MNa2CO3 |
1.5ml |
貯存：-20℃保存，穩定期1年
操作方法：
1) 準備待標抗體、HRP等等:
將待標抗體配成1mg／m1溶液。
2)生物素的活化：
從-20℃取出REAGENT Ⅱ溶媒，37℃水浴5分鐘至完全溶解，取100ul，加入到REAGENT Ⅰ生物素中，輕輕吹打至完全溶解�；靹蚴覝胤胖�60分鐘。
3)標記：
將活化的生物素全部轉入1ml待標物中，加入REAGENT Ⅳ100ul, PH約在8.0-9.0，室溫震蕩1～3h。（1小時能完成95%的反應，2小時99%，）
4) 透析：4℃條件下使上述混合液體以PBS透析過夜，中間換液若干次（如有沉淀，離心除去后再透析）。
5) 保存：加等體積甘油，-20℃分裝存放。
應用范圍：
用于HRP、蛋白、核酸及核酸探針、抗體、抗原的標記，也適用含有氨基（NH4-）的小分子標記。
特點：
1.操作簡便，標記率高，活性好。
2. 易于保存和運輸，減少生物素的失活。
注意事項：
1）透析袋選擇：
一定注意透析袋孔徑的大小，防止蛋白過多滲出。一般透析袋孔徑約為待標記蛋白分子量的1/10。如HRP 分子量是44KD，選擇3k；抗體150KD，選擇15K。
2）透析要充分，防止游離生物素，競爭反應。
3）本方法是針對待標記物的氨基進行標記。因此待標記物的緩沖液，如果是存在于硫酸銨、甘氨酸或Tris等等有氨基的緩沖液中，需以PBS緩沖液充分透析，防止干擾標記。
4）標記時，如果PH偏酸、低于在7.5，再加入REAGENT Ⅳ100ul或適量。
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