and 200 μg/ml Nuclease free BSA.
活性定義
在20 μl的連接反應體系中，6 μg的λDNA-Hind III的分解物在16℃下反應30分鐘時，有90%以上的DNA片段被連接所需要的酶量定義為1個活性單位（U）。
本酶的1 U相當于ATP-PPi交換反應中0.008 Weiss Unit。
純 度
1） 2,000 U的本酶和1 μg的λ-Hind III片段在37℃下反應24小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
2） 2,000 U的本酶和1 μg的Supercoiled pBR322 DNA在37℃下反應24小時，DNA的電泳譜帶不發生變化。
3） 2,000 U的本酶和1 μg的16S，23S rRNA在37℃下反應24小時，RNA
用 途
1）DNA片段和載體DNA的連接。
2）DNA片段和Linker或Adaptor DNA的連接。
使用注意
連接反應因末端堿基順序的不同而反應速度各異，一般有下列傾向：
突出末端：Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I
平滑末端：Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I
EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I
其中連接Hind III末端的速度約為連接Sal I末端速度的10～40倍；
而連接Hae III末端的速度約為連接Sma I末端速度的5～10倍。
附帶10×Buffer組成（保存：-20℃）
10×T4 DNA Ligase Buffer
Tris-HCl（pH 7.6） 660 mM
MgCl 66 mM
DTT 100 mM
ATP 1 mM
* Buffer在融解時，如果出現少量沉淀屬正�，F象，請于37℃保溫溶解后使用
使用舉例
DNA片段和載體DNA的連接
1. 在微量離心管中制備下列連接反應液。
10×T4 DNA Ligase Buffer 2.5 μl
DNA片段* 約0.3 pmol
載體DNA** 約0.03 pmol
T4 DNA Ligase 1 μl
dH2O up to 25 μl
* DNA片段的摩爾數應控制在載體DNA摩爾數的3～10倍。
** 平滑末端的載體與DNA片段進行連接時，應首先將載體進行去
磷酸化處理，以防止其自身環化。
2. 16℃過夜反應。
3. 加入2.5 μl（1/10量）的3 M CH3COONa（pH5.2）。
4. 加入62.5 μl（2.5倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置30～60分鐘。
5. 離心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。
6. 25～50 μl TE溶解，10～20 μl轉化至100 μl的感受態細胞中。
